ÿþAttivazione di ASIC mediante pH acido esterno. converse chiara ferragni A, corrente rappresentativa di acido Na rappresentata con potenziale di trattenimento di -60 mV in un ovocita. La linea continua sopra la traccia mostra il periodo di applicazione del pH acido (10 s). B, corrente rappresentativa interna di Na in un ovocita che esprime ASIC1a / 2a. La distanza indicata dalla coppia di frecce sinistra è il tempo necessario per raggiungere la corrente di picco (vedi "Procedure sperimentali"). La linea tratteggiata sovrapposta alla traccia è stata prodotta adattando il componente della corrente di sensibilizzazione con una funzione di decadimento esponenziale del primo ordine per calcolare la costante di tempo di inattivazione (Ä i).

Per affrontare il problema di una possibile dipendenza intracellulare di sodio dalla regolazione di ASIC da parte di CFTR, abbiamo co-espresso CFTR con un mutante di guadagno di funzione di ASIC2a, vale a dire G430F. Come mostrato nella Figura 8, l'espressione di G430F-ASIC2a da sola mostrava una corrente di Na verso l'interno costitutivamente attivata a pH e 7,5. L'applicazione del pH acido e (4.0) ha smascherato una nuova converse nere alte conduttanza Na sensibile all'acido aggiuntiva in 6 di 7 ovociti che esprimono G430F-ASIC2a. La corrente Na sensibile all'acido associata a G430F-ASIC2a ha impiegato fino a 8 s per raggiungere la sua attività massima e non ha mostrato alcuna tendenza a inattivarsi durante il periodo di osservazione (10 s).

L'influenza del CFTR sia sulla corrente di Na basale costitutivamente attivata converse platform nere sia sul componente sensibile all'acido (” I Na) sono riassunti in Fig. 8, C e D. Negli ovociti che esprimono G430F-ASIC2a da solo, la corrente basale (con un potenziale di mantenimento di "60 mV e pH e di 7,5) era "7490 ± 1018 nA (n = 14). La co-espressione CFTR non ha avuto effetti significativi su questa corrente (media, -9643 ± 1050 nA, n = 11; p> 0,05). Allo stesso modo, il CFTR non ha avuto alcun effetto sulla componente sensibile all'acido di G430F-ASIC2a ("3825 ± 648 nA contro "3541 ± 2158 nA, CFTR; n = 6). Il tempo al picco della corrente acid-gated (per quelli senza corrente di picco, è stato calcolato come tempo stabile) aumentato leggermente converse one star a 6059 ± 1078 ms da 5278 ± 1169 ms (p> 0,05).

Abbiamo co-espresso CFTR con ASIC1a e / o ASIC2a negli ovociti di Xenopus, e le correnti di Na protonate sono state valutate con la tecnica convenzionale del clamp di tensione a due elettrodi. I nostri risultati hanno dimostrato che il CFTR allo stato stazionario regola l'ASIC1a / 2a, il che era opposto all'effetto del CFTR sul ratto ENaC (8). Nel loro insieme, i nostri studi suggeriscono fortemente che il cross-talk tra CFTR e questi membri della famiglia ENaC / DEG è molto specifico. Sebbene la co-espressione CFTR non abbia alterato la protonazione degli ASIC, l'analisi della cinetica dell'interazione del Na esterno con l'eteromultimerica ASIC1a Il canale / 2a ha rivelato una diminuzione della concentrazione di Na necessaria per attivare la metà della corrente massima (Fig. 7).

Le correnti non si sono saturate a concentrazioni di Na comprese tra 0 e 100 m m. Non abbiamo misurato correnti a concentrazioni di Na più elevate perché l'aumento dell'osmolarità della soluzione cambierà il volume cellulare, che probabilmente attiverà gli ASIC, che sono sensibili agli stimoli meccanici (17). Il motivo per cui CFTR ha aumentato l'interazione del Na con il canale ASIC1a / 2a non è noto. Il CFTR può aumentare la probabilità aperta e l'espressione ASIC. L'espressione ENC negli ovociti porta ad un aumento della concentrazione citoplasmatica di sodio accompagnata da un potenziale di membrana depolarizzata a causa dell'attività costitutiva del canale.

Le nostre osservazioni secondo cui il tipo selvaggio ma non ”F508-CFTR hanno sovraregolato il converse bianche basse canale ASIC1a / 2a accrescono l'idea che il CFTR, funzionando come regolatore di una pletora di trasportatori di membrane plasmatiche, possa anche interagire con le proteine   delle membrane neuronali. Nel sistema nervoso centrale (SNC), la funzione degli ASIC è ancora ipotetica. La funzione primaria degli ASIC nel sistema nervoso centrale può essere quella di rilevare le cadute di pH nel tessuto cerebrale prodotte dal rilascio di neurotrasmettitori in condizioni fisiologiche che partecipano alla regolazione dell'attività sinaptica e in condizioni patofisiologiche, come ischemia cerebrale, convulsioni, epilessia e traumi , in cui si verifica una riduzione del pH dei tessuti.